PfAgo 核酸内切酶
【产品内容】 组份货号HPFA050HPFA0541PfAgo (1μM)200μL*1 支200μL*4 支2PfAgo Reaction Buffer (1
【产品内容】
组份 | 货号 | ||
HPFA050 | HPFA054 | ||
1 | PfAgo (1μM) | 200μL*1 支 | 200μL*4 支 |
2 | PfAgo Reaction Buffer (10X) | 100μl * 1 支 | 100μl * 4 支 |
3 | MnCl2 (40mM) | 50μL * 1 支 | 50μL * 4 支 |
【储存条件及有效期】
-20℃保存。收到后，建议分装，避免反复冻融。
【工作原理】
PfAgo 是一种来自嗜热古菌(Pyrococcus furiosus)的 Argonaute 蛋白，具有可编程的内切酶活性。它利用 5'-磷酸化的单链 DNA 引导序列（gDNA）来识别并切割互补的 DNA 靶序列。gDNA 一般为 16 -18 nt 长度 的 5’-磷酸化修饰的单链 DNA。酶切位点位于与引导序列互补的 5’端开始的第 10 和 11 个核苷酸之间。
【PfAgo的特点】
1. 高温活性（最佳温度约为 95°C）
2. 无需 PAM 序列（区别于 CRISPR 系统）
3. 通过 DNA 引导精准识别靶标
4. 可切割双链或单链 DNA
5. 适用于多重检测、分子诊断等场景
【需要但未提供的试剂】
1. 荧光分子信标报告探针（Reporter）；
2. gDNA：长度推荐在 16 - 22 nt，不超过 31 nt，gDNA 与靶标序列 3’端匹配结合时，避免 gDNA 的
5’端突出。
【应用示例】
PfAgo 可被设计为 高特异性核酸检测工具，在恒温条件下切割靶标 DNA/RNA，结合等温扩增（如 LAMP、RPA）提高灵敏度。例如 HPV 病毒检测或 SNP 分型与突变检测。
【检测步骤】
1 、目标序列特异性扩增。可采用 RPA，LAMP 或 PCR 扩增。
2 、反应体系：
组份名称 | 体积 | 终浓度 | |
1 | PfAgo Reaction Buffer (10X) | 2μL | 1X |
2 | MnCl2 (40mM) | 1μL | 2mM |
3 | gDNA (10μM) | 4μL | 2μM |
4 | PfAgo (1μM) | 4μL | 200nM |
5 | Reporter (10μM) | 1μL | 500nM |
6 | 扩增产物* | XμL | - |
7 | H2O | 补齐到 20 μL | |
*Positive Control 添加 8μL，包含 gDNA，Reporter 和扩增产物。
3 、设置反应温度 95°C， 每分钟读取一次荧光数值， 时间 30-40 分钟。
