OverExpress C43(DE3)化学转化感受态

OverExpress C43(DE3) 化学转化感受态细胞

产品简介

本品为大肠杆菌OverExpress C43(DE3)即为C43(DE3){基因型：F^-_omp_T _hsd_S_B (r_B^-  m_B^-) gal dcm (DE3)}制作的感受态。OverExpress C43(DE3)、OverExpress C41(DE3)两个菌株均起源于BL21(DE3)，其优点是可以高效表达毒性蛋白或疏水性蛋白。OverExpress C41(DE3)跟BL21(DE3)的区别在于其基因组含有至少一个未知突变，这个未知突变使其获得了高效表达毒性蛋白的能力，此突变位点参与大肠杆菌表达毒性蛋白时的细胞死亡途径；OverExpress C43(DE3)来源于OverExpress C41(DE3)，是通过筛选OverExpress C41(DE3)对另一个不同毒性蛋白的抗性菌株获得。OverExpress C43(DE3)菌株具有比OverExpress C41(DE3)更强的表达毒性蛋白和疏水性蛋白的能力，所以说OverExpress C43(DE3) 菌株与BL21(DE3)相比拥有至少两个未知突变，正是这两个未知突变使其获得了更广泛的表达毒性蛋白或疏水性蛋白的能力。此菌株含有 DE3区，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。OverExpress C43(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>5×10⁸ cfu/μg DNA。

产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

转化方法

1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。

注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。