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荧光定量PCR检测

荧光定量PCR检测荧光定量PCR 技术,是通过在PCRz 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,对起始

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服务编号:   HY3301     

服务提示:  定制价格根据技术复杂度及工作量而定

荧光定量PCR检测


荧光定量PCR 技术,是通过在PCRz 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的变化实时监测PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,对起始模板进行定量分析的方法。实验采用两种定量方式,即绝对定量和相对定量。荧光定量PCR 可用于mRNA 表达量水平检测、MicroRNA 表达量水平检测和基因拷贝数检测。实验的方法可分为SYBR Green I 法和TaqMan 探针法。实时荧光PCR技术已广泛应用于临床及生命科学研究的各个领域中。在科研方面可定量分析各种基因的表达分析, 基因突变和多态性分析,单核苷酸多态SNP测定及易位基因的检测;在医疗方面可用于免疫组化分析、临床疾病早期诊断、病原体检测、耐药性分析、肿瘤微小残留病变研究等。

荧光定量PCR常用术语:

--基线: 实时荧光定量PCR反应的基线是指在PCR开始的几个循环中(-般为3-15个循环) 的信号水平。此阶段的荧光信号变化量极小。低水平的基线信号相当于反应的背景或噪声。每个实时荧光定量PCR反应的基线应通过用户分析或扩增曲线自动分析,根据经验确定。基线的设置,会影响到荧光阈值及Ct值。

--荧光阈值: 荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,一般荧光阈值默认是PCR 3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍。

--Ct值: Ct值指的是PCR扩增过程中扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的循环数。

--标准曲线:标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的函数关系。对已知拷贝数的标准样品做系列稀释,对不同稀释度的标准样品进行荧光定量PCR并记录Ct值,根据Ct值及拷贝数的对数绘制得到标准曲线,标准曲线的纵坐标代表起始拷贝数的对数,横坐标代Ct值。

荧光定量PCR检测(图1)

订购信息

服务名称服务内容周期报价
基因组DNA水平基因拷贝数检测总DNA提取.引物设计. 荧光定量PCR及数据处理全套实验3-4周询价
转录组mRNA水平基因拷贝数检测总RNA提取.引物设计.通用引物反转录. 荧光定量PCR及数据处理全套3-4周
转录组miRNA水平基因拷贝数检测总RNA提取.引物设计.特异引物反转录.荧光定量PCR及数据处理全套3-4周

客户提供

提供样本

细胞:细胞数>10^6;

组织:总量>100 mg;

DNA 或RNA 样品:总量>2 μg。

可选样本引物:可由客户提供,没有引物的情况下,可由生工生物设计合成

提供信息

靶基因信息:包括基因序列或GenBank Accession Number 等;背景资料:包括生物物种信息(Human、Mouse、Rat 等)、DNA/RNA 来源、基因丰度等。

交付

交付报告

实验报告:包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等。

部分结果展示


内参GAPDH梯度稀释样品扩增


熔解曲线结果

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标准曲线结果

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